當前位置:首頁(yè)>技術(shù)支持>實(shí)驗指南

實(shí)驗指南

聯(lián)系我們Contact Us

昆明森愷生物科技有限公司

電 話(huà):0871-63609861

手 機:0871-63609861

郵 箱:1647894476@qq.com

地 址:云南省昆明市盤(pán)龍區萬(wàn)華路天宇創(chuàng )智中心802室

FC實(shí)驗操作流程

2022-06-20
594次

FC實(shí)驗步驟

一、細胞表面染色操作流程

1、細胞計數:將培養好的細胞收集于15mL離心管并計數;500g離心4min,去上清;

2、制備單細胞懸液:將收集的細胞用1mL 0.5%BSA/PBS溶液重懸,400g離心3min,去上清,重復2次;用0.5%BSA/PBS溶液重懸細胞至濃度1x106個(gè)細胞/mL,分配到96孔板中,每孔100μl細胞懸液;

3、(可選)阻斷Fc受體:室溫孵育10-20min;

4、一抗孵育:每孔加入稀釋后的一抗溶液100μl,2-8℃反應30min;

5、洗滌:400g離心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,離心去上清,重復兩遍;

6、二抗孵育:對于非熒光染料直標抗體,加入100μl熒光二抗重懸,避光2-8℃反應30min。對于直標抗體直接跳到步驟8;

7、洗滌:400g離心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,離心去上清,重復兩遍;

8、用200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸細胞,4℃保存,上機分析。

二、細胞胞內染色操作流程

1、細胞計數:將培養好的細胞收集于15mL離心管并計數;500g離心4min,去上清;

2、制備單細胞懸液:將收集的細胞用1mL 0.5%BSA/PBS溶液重懸,400g離心3min,去上清,重復2次;用0.5%BSA/PBS溶液重懸細胞至濃度1x106個(gè)細胞/mL,分配到96孔板中,每孔100μl細胞懸液,400g離心5min去上清;

3、固定:每孔加入100μl細胞固定劑重懸細胞,2-8°孵育20min;

4、洗滌:400g離心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,離心去上清,重復兩遍;

5、通透:每孔加入100μl細胞通透劑重懸細胞,室溫孵育20min;

6、洗滌:400g離心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,離心去上清,重復兩遍;

7、(可選)阻斷Fc受體:10-20min;

8、一抗孵育:每孔加入稀釋后的一抗溶液100μl,2-8℃反應30min;

9、洗滌:400g離心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,離心去上清,重復兩遍;

10、二抗孵育:對于非熒光染料直標抗體,加入100μl熒光二抗重懸,避光2-8℃反應30min。對于直標抗體直接跳到步驟11;

11、洗滌:400g離心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,離心去上清,重復兩遍;

12、用200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸細胞,4℃保存,上機分析。


下一篇:沒(méi)有了!